Làm thế nào để kiểm tra chất lượng men beta-glucan?

Beta-glucan có nguồn gốc từ các nguồn khác nhau có cấu trúc phân tử khác nhau, dẫn đến các hoạt động miễn dịch khác nhau. Ví dụ, men beta1,3/1,6-D-glucanase có cấu trúc phân tử độc đáo, đặc biệt là tỷ lệ liên kết beta-1,6-glycosid trên tổng số liên kết glycosid. Cấu trúc phân tử này giúp các thụ thể tế bào miễn dịch dễ dàng nhận biết nhanh chóng, điều này dẫn đến việc điều hòa tế bào miễn dịch hiệu quả (Danielson và cộng sự, 2010).

Các phương pháp thử nghiệm phổ biến trên thế giới

Điều quan trọng là kiểm tra chất lượng beta-glucan trong nấm men. Thông thường, hàm lượng beta-glucan quyết định chất lượng của beta-glucan nấm men. Nói chung, beta-glucan có hàm lượng cao sẽ có chất lượng tốt hơn. Đặc biệt nó liên quan đến tiêu chuẩn và phương pháp kiểm soát hàm lượng beta-glucan của nấm men và các sản phẩm liên quan của nấm men. Kiểm tra beta-glucan là biện pháp chính để kiểm tra tiêu chuẩn sản phẩm. Chất lượng hàm lượng beta-glucan nấm men trong một sản phẩm nhất định rất quan trọng để đo lường tiêu chuẩn và chất lượng. Các phương pháp HPLC Việc kiểm tra chất lượng beta-glucan của nấm men có ưu điểm là có thể đo lường chất lượng và số lượng sản phẩm bằng cách kết hợp. Beta-glucan trong các sản phẩm nấm men có thể được phát hiện cụ thể. Phương pháp này có hiệu quả cao về khả năng phân tách và độ nhạy, giới hạn phát hiện thấp, sai số lặp lại tối thiểu và không bị nhiễu. Nếu 70% hàm lượng beta-glucan có trong sản phẩm thì đó được coi là chất lượng tốt của beta-glucan (Danielson và cộng sự, 2010).

Các chuyên khảo của FCC là các tiêu chuẩn được quốc tế công nhận về thành phần thực phẩm. Đây là những tài liệu thông tin được thiết kế để hỗ trợ người tiêu dùng trong việc xác định hoặc xác thực các thành phần thực phẩm khác nhau hoặc các sản phẩm nông nghiệp khác. Chuyên khảo của FCC bao gồm các thử nghiệm và thông số kỹ thuật khác để nhận dạng sản phẩm, tạp chất và các thử nghiệm khác hữu ích trong việc mô tả độ tinh khiết và chất lượng của các thành phần. Đối với con người, điều quan trọng là sử dụng beta-glucan với hàm lượng cao hơn (Beta Glucan Monograph, 2011).

Tiêu chuẩn HPLC-Trung Quốc

HPLC là viết tắt của Sắc ký lỏng hiệu năng cao. Đó là một kỹ thuật hóa học phân tích có thể tách, xác định và định lượng chính xác từng nguyên tố trong hỗn hợp phản ứng. Các phương pháp HPLC để kiểm tra chất lượng beta-glucan nấm men được phát triển tốt và được chấp nhận rộng rãi. Mẫu beta-glucan khối lượng khô được xác định bằng cách sấy khô đến khối lượng không đổi. Đối với phương pháp thủy phân bằng axit, phương pháp trifluoroacetic (TFA) hoặc axit sulfuric được sử dụng. Mẫu được kiểm tra thêm để phân tích phần khối lượng beta-glucan. Nồng độ glucose trong các mẫu thủy phân được xác định bằng cách sử dụng HPLC và được xử lý để xác định phần khối lượng của beta-glucan trong tổng lượng carbohydrate. Glucose được xác định bằng cách sử dụng HPLC được trang bị đầu dò. Tỷ lệ Acetonitril/nước (75:25) dùng làm pha động với tốc độ dòng 1ml/phút và nhiệt độ cột 40oC trong 12 phút. Phần khối lượng của beta-glucan được tính toán từ nồng độ glucose trong dịch thủy phân sử dụng HPLC (Freimund và cộng sự, 2005; Zechner-Krpan và cộng sự, 2010).
Quang phổ FTIR được sử dụng để phân tích các polysaccharide khác nhau, bao gồm cả beta-glucan. Ứng dụng của FTIR beta-glucan có lợi thế khi sử dụng cho mục đích thực phẩm. Các mẫu protein đã được phân tích và thực hiện phân tích vi mô nguyên tố hữu cơ của các mẫu beta-glucan đông khô. Phương pháp này trước hết sử dụng quang phổ hồng ngoại FTIR để xác định chất cần đo là beta 1,3/1,6-D-glucan, sau đó đo hàm lượng beta-glucan bằng sắc ký lỏng HPLC. Ưu điểm của phương pháp phát hiện này là độ ổn định cao.

FCC(USP)- Tiêu chuẩn Hoa Kỳ

Dược điển Hoa Kỳ (USP) đã phát triển chuyên khảo để xác định beta-glucan từ men làm bánh (Saccharomyces cerevisiae). Ủy ban Chuyên gia USP đã phê duyệt các chuyên khảo được đề xuất sau khi được xuất bản trên Diễn đàn Dược điển để lấy ý kiến công chúng. USP đặt ra các tiêu chuẩn để các nhà sản xuất tuân thủ các sản phẩm được tiếp thị hợp pháp tại Hoa Kỳ. Những chuyên khảo này đề cập đến chất lượng, nhận dạng, ghi nhãn, độ tinh khiết và hiệu lực, cùng với các thử nghiệm khác (Beta Glucan Monograph, 2011).
FCC sử dụng beta1,3/1,6-D-glucanase để phân hủy beta1,3/1,6-D-glucan thành glucose nên giá trị đo trực tiếp là beta1,3/1,6-D - Hàm lượng glucan nên phương pháp này khắt khe hơn. Nó chủ yếu dựa trên phương pháp enzyme glucose. Kỹ thuật này liên quan đến quá trình tiêu hóa beta-glucan thành glucose, được đo thêm bằng phương pháp enzyme đo màu. Đầu tiên, beta-glucan chứa được hồ hóa trong dung dịch KOH. Sau đó mẫu được pha loãng với dung dịch đệm và xử lý bằng enzyme lyticase. Lylyase là một enzyme endglucanase có tác dụng phân hủy một phần beta-glucan và hòa tan nó. Lylyase được xử lý bằng exo—1,3-β-D-glucanase và beta-glucosidase có sẵn, giúp chuyển đổi oligosaccharide beta-glucan hòa tan thành glucose (Danielson và cộng sự, 2010).
Nhược điểm của phương pháp này là nó cần được thử nghiệm bằng một loại enzyme cụ thể. Hơn nữa, do hoạt động của enzyme không ổn định lắm nên kết quả xét nghiệm có thể thay đổi đáng kể. Nhưng phương pháp này là phương pháp thử nghiệm được quốc tế công nhận nhất hiện nay.

Phương pháp thử nghiệm Hiyeast

Hiyeast là nhà sản xuất men β-glucan chuyên nghiệp tại Trung Quốc.
Họ sản xuất ra sản phẩm beta-glucan men chất lượng cao nhất đáp ứng các tiêu chí của Chinese-HPLC và tiêu chuẩn quốc tế của FCC (USP). Sứ mệnh là cải thiện sức khỏe cộng đồng theo tiêu chuẩn quốc tế (Danielson và cộng sự, 2010). Những phương pháp kiểm tra chất lượng này đảm bảo chất lượng, độ an toàn và lợi ích của thuốc và thực phẩm. Phương pháp thử nghiệm Hiyeast là tiêu chuẩn cao và kết quả thử nghiệm theo tiêu chuẩn quốc tế.
Hiyeast cung cấp beta-glucan men chất lượng cao nhất vì mỗi lô men beta-glucan xuất khẩu đều được kiểm tra bằng phương pháp HPLC. Đó là chất lượng cao có chứa ít nhất 70% hàm lượng beta-glucan. Ngoài ra, họ cũng cung cấp dịch vụ kiểm tra bên ngoài của USP và sản phẩm đã được thông qua tổ chức có thẩm quyền ở Hoa Kỳ để thử nghiệm - CCRC (trung tâm nghiên cứu carbohydrate phức hợp). Nhận dạng NMR của liên kết beta-glucan/tổng liên kết beta-1,3/1,6-Glucan (1,6) là 17% (Zechner-Krpan và cộng sự, 2010).
Hiện nay, hầu hết tất cả men β-glucan xuất khẩu ở Trung Quốc đều được kiểm tra bằng HPLC. Ngoài ra, phương pháp kiểm nghiệm HPLC cho từng lô sản phẩm còn cung cấp dịch vụ gửi đến tổ chức có thẩm quyền để kiểm định. Hiyeast cam kết cung cấp các thành phần chức năng cải tiến, khác biệt và đã được chứng minh khoa học để giúp khách hàng có được những sản phẩm chất lượng góp phần tạo nên một thế giới lành mạnh và bền vững.

Người giới thiệu

Chuyên khảo Beta Glucan. (2011). USP sử dụng thông tin Biothera cho chuyên khảo Beta Glucan. Sản phẩm tự nhiên INSIDER. https://www.naturalproductsinsider.com/regulatory/usp-uses-biothera-info-beta-glucan-monograph

Černá, M., Barros, A. S., Nunes, A., Rocha, S. M., Delgadillo, I., Čopı́ková, J., & Coimbra, MA (2003). Sử dụng quang phổ FT-IR làm công cụ phân tích các chất phụ gia thực phẩm polysacarit. Polyme carbohydrate, 51(4), 383–389. https://doi.org/10.1016/S0144-8617(02)00259-X

Danielson, ME, Dauth, R, Elmasry, NA, Langeslay, RR, Magee, AS. & Will, P. M. (2010). Phương pháp enzym để đo hàm lượng β-1,3-β-1,6-Glucan trong chiết xuất và các sản phẩm có công thức (Xét nghiệm GEM). Tạp chí hóa học nông nghiệp và thực phẩm, 58(19), 10305–10308. https://doi.org/10.1021/jf102003m

Freimund, S., Janett, S., Arrigoni, E.,. & Amad, R. (2005). Phương pháp định lượng tối ưu hóa 1,3- β -d-glucan vàɑ-d-mannan có nguồn gốc từ nấm men. Nghiên cứu và Công nghệ Thực phẩm Châu Âu, 220(1), 101–105. https://doi.org/10.1007/s00217-004-1008-0

Zechner-Krpan, V., Petravi, V., Gospodari, I., & Sajli, L. (2010). Đặc tính của b-Glucans được phân lập từ men bia và được sấy khô bằng các phương pháp khác nhau. 9.